PCR管采購(gòu)介紹

PCR管采購(gòu)介紹

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PCR技術(shù)類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。

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PCR由變性一退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。這個(gè)反應(yīng)過(guò)程在PCR反應(yīng)容器中進(jìn)行，隨著基因擴(kuò)增儀的不斷發(fā)展，其反應(yīng)容器也經(jīng)歷了從1.5ml到0.2ml (0.25m1）的離心管逐步發(fā)展成PCR專(zhuān)用的薄壁的0.2ml，0.1mlpcr管。

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隨著pcr擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)量的提高，逐步形成了PCR條、PCR板高通量的基因擴(kuò)增容器。

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PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成

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模板DNA的變性：

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模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備。

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模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：

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模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右后,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合。

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引物的延伸：

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DNA模板——引物結(jié)合物在Taq的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。

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PCR技術(shù)的基本原理

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該技術(shù)是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴(lài)于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。

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DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來(lái)啟動(dòng)合成，通過(guò)一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補(bǔ)序列結(jié)合，形成部分雙鏈。

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在適宜的溫度和環(huán)境下，DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此為起始點(diǎn)，沿模板5′→3′方向延伸，合成一條新的DNA互補(bǔ)鏈。

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PCR管和離心管的區(qū)別

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PCR管：

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PCR反應(yīng)板是96孔或者384孔，是專(zhuān)門(mén)為批量反應(yīng)設(shè)計(jì)的，其原理是PCR儀和測(cè)序儀的通量一般為96或者384。

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離心管：

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離心管不一定是PCR管，離心管按照其容量分好多種，常用的有1.5ml，2ml，5ml,15或者50ml，最小的一種（(250ul)可作為PCR管使用。

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如何選擇PCR管

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我們選擇PCR管的放置位置是希望選擇溫度最準(zhǔn)確的位置。

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而溫度最準(zhǔn)確的位置應(yīng)該是模塊下溫度傳感器上面的位置(不考慮傳感器溫度不準(zhǔn)的問(wèn)題)。

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而不同PCR儀的溫度傳感器的位置是不一樣的。

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比如AB的2720只有一個(gè)在中間,MJ的200有三個(gè)傳感器，為左下、中間和右上,Eppendorf的應(yīng)該是在A行或H行，而東勝龍811則有三個(gè)溫度傳感器，應(yīng)選擇B1-2，C1-2，C6-7，D6-7，B11-12，C11-12，因?yàn)檫@些點(diǎn)是溫度準(zhǔn)點(diǎn)。